В Канаде разработан конкурентный ИФА-тест на антитела, блокирующие связывание S-белка коронавируса с клеточным рецептором ACE2.

Как известно, с помощью стандартных ИФА тестов можно определить наличие в крови различных клонов антител к SARS-CoV-2. Выявление же именно нейтрализующих антител обычно проводится с использованием культур клеток, вирусов или псевдовирусов, что трудозатратно и требует длительного времени.

Канадские ученые модифицировали ИФА таким образом, чтобы с его помощью стало возможно детектировать те антитела, которые блокируют взаимодействие рецептор-связывающего домена (RBD) вируса SARS-CoV-2 с клеточным ACE2.

Они заменили обычный конъюгат (антитело, меченное пероксидазой хрена (HRP), на рекомбинантный растворимый ACE2, меченый биотином. Последующее инкубирование с комплексом стрептавидин-HRP используется для обнаружения ACE2, связавшегося с антигеном — RBD, иммобилизованном на лунках планшетов.

В результате был получен конкурентный анализ, в котором наличие в образцах антител, блокирующих связывание растворимого ACE2 с иммобилизованным RBD, приводит к дозозависимому снижению сигнала. Общее время анализа составляет 3,5–4 часа.

Используя как конкурентный, так и прямой ИФА ученые проанализировали 58 образцов сыворотки крови от доноров, переболевших COVID-19 или контактировавших с больными. Конкурентный ИФА показал, что образцы с высоким уровнем IgG к RBD, как правило, наиболее эффективно блокируют взаимодействие RBD-ACE2. И наоборот, образцы, в которых отсутствовали RBD-связывающие антитела, не были способны блокировать это взаимодействие.

Новый метод может использоваться как дополнение к стандартным методам обнаружения нейтрализующих антител и в сероэпидемиологических исследованиях.

Источник: Kento T. Abe, et al. // A simple protein-based SARS-CoV-2 surrogate neutralization assay. // bioRxiv preprint 2020.07.11.